실험실 연구에서 신뢰할 수 있는 Qpcr 결과를 위한 핵심 기술

양적 PCR (qPCR) 와 실시간 PCR은 분자 생물학의 기본 도구이지만, 그 차이와 응용에 대한 혼란은 계속되고 있습니다.이 포괄적 인 가이드는 신뢰할 수 있는 실험 결과를 얻기 위한 최선의 방법을 탐구하면서 이러한 기술을 명확히합니다..

qPCR와 실시간 PCR은 종종 상호 교환적으로 사용되지만 동일한 기술의 약간 다른 측면을 나타냅니다.

• 실시간 PCR플루오레센스 검출을 통해 DNA 증폭의 실시간 모니터링을 강조합니다.
• qPCR특히 원형의 초기 농도를 결정하는 핵산의 정량 분석에 초점을 맞추고 있습니다.

이 두 기술은 연구자들이 증폭을 추적할 수 있게 함으로써 분자 진단에 혁명을 일으켰고, 증폭 후 젤 전해질의 필요성을 제거했다.

임계 사이클은 양적 분석에서 중요한 매개 변수를 나타냅니다.

• Ct (Threshold Cycle): 플루오레센스가 배경 수준을 초과할 때 주기 번호를 나타내는 전통적인 용어.
• Cq (정량화 주기): 측정의 양적 성격을 더 정확하게 반영하는 현대 용어.

낮은 Ct/Cq 값은 더 높은 초기 템플릿 농도를 나타냅니다. 적절한 표준과 결합하면 상대적 및 절대적 수치화 모두 가능합니다.

표준 PCR 원칙은 적용되지만 qPCR는 더 엄격한 프라이머 요구 사항을 요구합니다.

• 18~25개의 기본쌍 길이
• GC 함량은 40-60%
• 60~65°C의 녹기 온도
• 최소 2차 구조 형성

• 프로브 기반 분석에 대한 프로브 호환성
• 타겟이 아닌 결합을 최소화하기 위한 향상된 특수성
• 프라이머 다이머 형성을 방지하기 위해 최적화된 염기서열

실시간 PCR는 분자 분석에 상당한 발전을 제공합니다.

• PCR 후 처리 없이 정확한 정량화
• 단본 번호까지 감지 민감도
• 닫힌 파이프 형식 으로 오염 위험성 을 줄이
• 크기의 7~8등급의 동적 범위
• 동시에 목표물을 탐지할 수 있는 멀티플렉스 기능

현대 PCR 변종은 연구의 필요를 충족시킵니다.

젤 전자기분석으로 질적 분석을 위한 최종점 검출

불빛 검출을 통해 정확한 정량화를 가능하게 하는 운동 모니터링

분해를 제한하고 표준 곡선 요구 사항을 제거하는 포이슨 통계를 통해 절대 정량화.

이러한 접근법은 다양한 실험 과제를 해결합니다.

• 내장 PCR두 개의 프라이머 세트를 통해 연속 증폭을 통해 특수성을 향상시킵니다.
• 실시간 PCR증폭 과정 전체에 양적 데이터를 제공합니다.

최적의 시스템 성능을 위한 핵심 요소는 다음과 같습니다.

• 샘플 처리 용량
• 탐지 감수성 및 동적 범위
• 멀티플렉스 검사용 광적 구성
• 열의 균일성 및 회전 속도
• 데이터 분석 소프트웨어 기능

실시간 PCR는 다양한 과학 및 임상 응용 분야에 사용됩니다.

• 연구에서의 유전자 발현 프로파일링
• 병원체 검출 및 바이러스 부하 수치
• 암 진단에서 온코겐 돌연변이 분석
• 의약품 개발에 대한 약물 생체 연구
• 농산물에서 GMO 검출
• 법의학 분석 및 유전자 검사

이 기술은 탐사 화학, 기기 및 데이터 분석 방법의 혁신과 함께 계속 발전하고 있습니다.생명과학 연구 및 분자 진단의 필수 도구로서의 위치를 강화.